Կարբապենեմ-դիմացկուն Hypervi-ի կլինիկական և մոլեկուլային բնութագրերը

Javascript-ը ներկայումս անջատված է ձեր դիտարկիչում:Երբ javascript-ն անջատված է, այս կայքի որոշ գործառույթներ չեն աշխատի:
Գրանցեք ձեր կոնկրետ մանրամասները և հատուկ հետաքրքրություն ներկայացնող դեղերը, և մենք կհամապատասխանենք ձեր տրամադրած տեղեկատվությունը մեր լայնածավալ տվյալների բազայի հոդվածներին և ժամանակին կուղարկենք ձեզ PDF պատճենը էլեկտրոնային փոստով:
Կարբապենեմ-դիմացկուն բարձր վիրուսային Klebsiella pneumoniae-ի կլինիկական և մոլեկուլային բնութագրերը Շանհայի երրորդական հիվանդանոցում
Չժոու Կոնգ, 1 Ու Ցիանգ, 1 Հե Լեկի, 1 Չժան Հույ, 1 Սյու Մաոսուո, 1 Բաո Յույուան, 2 Ջին Չժի, 3 Ֆանգ Շեն 11 Կլինիկական լաբորատոր բժշկության բաժանմունք, Շանհայի հինգերորդ ժողովրդական հիվանդանոց, Ֆուդանի համալսարան, Շանհայ, Ժողովրդական Հանրապետություն Չինաստան;2 Շանհայ Ցզյաոտոնգի լաբորատոր բժշկության բաժանմունք, Շանհայի մանկական հիվանդանոց, Շանհայ, Չինաստանի Ժողովրդական Հանրապետություն;3 Նյարդաբանության բաժանմունք, Շանհայի հինգերորդ ժողովրդական հիվանդանոց, Ֆուդանի համալսարան Համապատասխան հեղինակ՝ Ֆանգ Շեն, Կլինիկական լաբորատոր բժշկության բաժանմունք, Շանհայի հինգերորդ ժողովրդական հիվանդանոց, Ֆուդանի համալսարան, թիվ 128 Ruili Road, Minhang District, Shanghai, China218Tel +2024 փոստային ինդեքս: Email [email protected] Նախապատմություն. Klebsiella pneumoniae-ում կարբապենեմի դիմադրության և հիպերվիրուլենտության միաձուլումը հանգեցրել է հանրային առողջության լուրջ մարտահրավերների:Վերջին տարիներին ավելի ու ավելի շատ են հաղորդումները կարբապենեմի նկատմամբ կայուն բարձր վիրուսային Klebsiella pneumoniae (CR-hvKP) մեկուսացման վերաբերյալ:Նյութեր և մեթոդներ. CR-hvKP-ով վարակված հիվանդների կլինիկական տվյալների գնահատման հետահայաց վերլուծություն 2019 թվականի հունվարից մինչև 2020 թվականի դեկտեմբեր երրորդական հիվանդանոցում:Հաշվեք Klebsiella pneumoniae, Klebsiella pneumoniae (hmKP), carbapenem-ակայուն Klebsiella pneumoniae (CR-hmKP) և կարբապենեմակայուն բարձր վիրուսային թոքաբորբը, որոնք հավաքվել են 2 տարվա ընթացքում: Leberella-ի մեկուսացվածների թիվը (CR-):ՊՇՌ-ի հայտնաբերում դիմադրողական գեների, վիրուլենտության հետ կապված գեների, պարկուճային սերոտիպային գեների և CR-hvKP մեկուսացվածների բազմալոկուսային հաջորդականության տիպավորում (MLST):Արդյունքներ. Ուսումնասիրության ընթացքում առանձնացվել են 1081 չկրկնվող Klebsiella pneumoniae շտամներ:, Ներառյալ Klebsiella pneumoniae-ի 392 շտամներ (36.3%), 39 շտամներ CR-hmKP (3.6%) և 16 շտամներ CR-hvKP (1.5%):CR-hvKP-ի մոտավորապես 31.2%-ը (5/16) կմեկուսացվի 2019 թվականին, իսկ CR-hvKP-ի մոտավորապես 68.8%-ը (11/16) կմեկուսացվի 2020 թվականին: 16 CR-hvKP շտամներից 13-ը և ST շտամներն են։ սերոտիպ K64, 1 շտամը ST11 և K47 սերոտիպն է, 1 շտամը ST23 և K1 սերոտիպն է, իսկ 1 շտամը ST86 և K2 սերոտիպն է:Վիրուլենտության հետ կապված entB, fimH, rmpA2, iutA և iucA գեները առկա են բոլոր 16 CR-hvKP մեկուսացվածներում, որին հաջորդում են mrkD (n=14), rmpA (n=13), aerobactin (n=2), AllS ( n=1):16 CR-hvKP մեկուսացումները բոլորն էլ կրում են կարբապենեմազի blaKPC-2 գենը և ընդլայնված սպեկտրի β-լակտամազային blaSHV գենը:ERIC-PCR ԴՆԹ-ի մատնահետքի արդյունքները ցույց են տվել, որ 16 CR-hvKP շտամներ խիստ պոլիմորֆ են, և յուրաքանչյուր շտամի ժապավենները զգալիորեն տարբեր են՝ ցույց տալով սպորադիկ վիճակ:Եզրակացություն. Չնայած CR-hvKP-ն տարածվում է ժամանակ առ ժամանակ, այն տարեցտարի ավելանում է:տարին։Հետևաբար, պետք է առաջացնել կլինիկական ուշադրություն և անհրաժեշտ միջոցներ ձեռնարկել՝ խուսափելու սուպերբակտերիաների CR-hvKP-ի կլոնավորումից և տարածումից:Հիմնաբառեր՝ Klebsiella pneumoniae, կարբապենեմի դիմադրություն, բարձր վիրուլենտություն, բարձր լորձ, համաճարակաբանություն
Klebsiella pneumoniae-ն պատեհապաշտ պաթոգեն է, որը կարող է առաջացնել մի շարք վարակներ, այդ թվում՝ թոքաբորբ, միզուղիների վարակներ, բակտերեմիա և մենինգիտ:1 Անցած երեսուն տարիների ընթացքում, ի տարբերություն դասական Klebsiella pneumoniae-ի (cKP), նոր խիստ վիրուսային Klebsiella pneumoniae (hvKP) հիպերլորձաթաղանթը դարձել է կլինիկական կարևոր պաթոգեն, որը կարող է հայտնաբերվել խիստ ագրեսիվ վարակների դեպքում, ինչպիսիք են լյարդի թարախակույտերը, որոնք առաջանում են առողջ մարդկանց մոտ: և իմունային անբավարարություն ունեցող անձինք:2 Հարկ է նշել, որ այս վարակները սովորաբար ուղեկցվում են կործանարար տարածված վարակներով, ներառյալ էնդոֆթալմիտը և մենինգիտը:3 Բարձր լորձաթաղանթի լորձաթաղանթի hvKP ֆենոտիպի արտադրությունը սովորաբար պայմանավորված է պարկուճային պոլիսախարիդների արտադրությամբ և հատուկ վիրուսային գեների առկայությամբ, ինչպիսիք են rmpA և rmpA2.4:Լորձի բարձր ֆենոտիպը սովորաբար որոշվում է «լարային թեստով»:Klebsiella pneumoniae գաղութները, որոնք աճում են գիշերում արյան ագարի թիթեղների վրա, ձգվում են օղակով:Երբ ձևավորվում է ավելի քան 5 մմ երկարությամբ մածուցիկ պարան, «պարանի թեստը» դրական է:5 Վերջերս կատարված ուսումնասիրությունը ցույց է տվել, որ peg-344, iroB, iucA, rmpA rmpA2 և rmpA2 բիոմարկերներ են, որոնք կարող են ճշգրիտ որոշել hvkp-ը:6 Այս ուսումնասիրության մեջ բարձր վիրուլենտ Klebsiella pneumoniae-ն սահմանվել է որպես բարձր լորձային մածուցիկ ֆենոտիպ (լարային թեստի դրական արդյունք) և կրող Klebsiella pneumoniae վիրուսային պլազմիդի հետ կապված տեղամասեր (rmpA2, iutA, iucA): - ձեռք բերված լյարդի թարախակույտներ, որոնք առաջանում են hvKP-ով, որոնք ուղեկցվում են ծայրամասային օրգանների ծանր վնասմամբ, ինչպիսիք են մենինգիտը և էնդոֆթալմիտը:7,8 hvKP-ն հաճախակի փոխանցում ունի Ասիայի, Եվրոպայի և Ամերիկայի շատ երկրներում:Չնայած hvKP-ի մի քանի դեպքեր են գրանցվել Եվրոպայում և Ամերիկայում, hvKP-ի տարածվածությունը հիմնականում տեղի է ունեցել ասիական երկրներում, հատկապես Չինաստանում:9
Ընդհանուր առմամբ, hvKP-ն ավելի զգայուն է հակաբիոտիկների նկատմամբ, մինչդեռ կարբապենեմակայուն Klebsiella թոքաբորբը (CRKP) ավելի քիչ թունավոր է:Այնուամենայնիվ, թմրամիջոցների դիմադրության և վիրուսային պլազմիդների տարածմամբ, CR-hvKP-ն առաջին անգամ նկարագրվել է Zhang et al.2015-ին, և ավելի ու ավելի շատ են ներքին հաշվետվությունները։10 Քանի որ CR-hvKP-ն կարող է առաջացնել լուրջ և դժվար բուժվող վարակներ, եթե համաճարակի կլոն հայտնվի, այն կարող է դառնալ հաջորդ «սուպերբակտերիաները»:Մինչ օրս CR-hvKP-ով առաջացած վարակների մեծ մասը տեղի է ունեցել սպորադիկ դեպքերում, և փոքրամասշտաբ բռնկումները հազվադեպ են:11,12
Ներկայումս CR-hvKP-ի հայտնաբերման մակարդակը ցածր է, և կան քիչ հարակից ուսումնասիրություններ:CR-hvKP-ի մոլեկուլային համաճարակաբանությունը տարբեր է տարբեր շրջաններում, ուստի անհրաժեշտ է ուսումնասիրել այս տարածաշրջանում CR-hvKP-ի կլինիկական բաշխումը և մոլեկուլային համաճարակաբանական բնութագրերը:Այս ուսումնասիրությունը համակողմանիորեն վերլուծել է CR-hvKP-ի դիմադրողականության գեները, վիրուլենտության հետ կապված գեները և MLST:Մենք փորձեցինք ուսումնասիրել CR-hvKP-ի տարածվածությունը և մոլեկուլային համաճարակաբանությունը Շանհայի արևելյան Չինաստանի երրորդ հիվանդանոցում:Այս ուսումնասիրությունը մեծ նշանակություն ունի Շանհայում CR-hvKP-ի մոլեկուլային համաճարակաբանությունը հասկանալու համար:
2019 թվականի հունվարից մինչև 2020 թվականի դեկտեմբեր Շանհայի հինգերորդ ժողովրդական հիվանդանոցից չկրկնվող Klebsiella pneumoniae մեկուսացվածները հետադարձ կերպով հավաքվել են, և հաշվարկվել են hmKP, CRKP, CR-hmkp և CR-hvKP տոկոսները:Բոլոր մեկուսացվածները նույնականացվել են VITEK-2 կոմպակտ ավտոմատ մանրէաբանական անալիզատորի միջոցով (Biomerieux, Marcy L'Etoile, Ֆրանսիա):Maldi-Tof զանգվածային սպեկտրոմետրիա (Bruker Daltonics, Billerica, MA, ԱՄՆ) օգտագործվել է բակտերիալ շտամների նույնականացման վերստուգման համար:Լորձի բարձր ֆենոտիպը որոշվում է «լարային թեստով»:Երբ իմիպենեմը կամ մերոպենեմը դիմացկուն են, կարբապենեմի դիմադրությունը որոշվում է դեղերի նկատմամբ զգայունության թեստի միջոցով:Բարձր վիրուլենտ Klebsiella pneumoniae-ն սահմանվում է որպես լորձի բարձր ֆենոտիպ (լարային թեստի դրական արդյունք) և կրող Klebsiella pneumoniae վիրուսային պլազմիդի հետ կապված տեղամասեր (rmpA2, iutA, iucA)6:
Մեկ Klebsiella pneumoniae գաղութը պատվաստվել է 5% ոչխարի արյան ագարի ափսեի վրա:Գիշերային ինկուբացիայից հետո 37°C ջերմաստիճանում, նրբորեն քաշեք գաղութը պատվաստման օղակով և կրկնեք 3 անգամ:Եթե ​​մածուցիկ գիծը ձևավորվում է երեք անգամ, և երկարությունը 5 մմ-ից մեծ է, ապա «գծային թեստը» համարվում է դրական, և շտամն ունի լորձի բարձր ֆենոտիպ:
VITEK-2 կոմպակտ ավտոմատ մանրէաբանական անալիզատորում (Biomerieux, Marcy L'Etoile, Ֆրանսիա) հակամանրէային զգայունությունը մի քանի սովորաբար օգտագործվող հակաբիոտիկների նկատմամբ հայտնաբերվել է արգանակի միկրո նոսրացման միջոցով:Արդյունքները մեկնաբանվում են Կլինիկական և լաբորատոր ստանդարտների ինստիտուտի կողմից մշակված ուղեցույցի փաստաթղթի համաձայն (CLSI, 2019):E. coli ATCC 25922-ը և Klebsiella pneumoniae ATCC 700603-ը օգտագործվել են որպես հակամանրէային զգայունության թեստավորման հսկիչներ:
Բոլոր Klebsiella pneumoniae մեկուսացվածների գենոմային ԴՆԹ-ն արդյունահանվել է TIANamp Bacteria Genomic DNA Kit-ի միջոցով (Tiangen Biotech Co. Ltd., Պեկին, Չինաստան):Ընդլայնված սպեկտրի β-լակտամազային գեներ (blaCTX-M, blaSHV և blaTEM), կարբապենեմազային գեներ (blaKPC, blaNDM, blaVIM, blaIMP և blaOXA-48) և 9 ներկայացուցչական վիրուսային գեներ, ներառյալ pLVPK Plasmid-like filociall (pLVPK) , mrkD, entB, iutA, rmpA, rmpA2, iucA և aerobactin) ուժեղացվել են PCR-ով, ինչպես նախկինում նկարագրված է:13,14 պարկուճային սերոտիպային հատուկ գեներ (K1, K2, K5, K20, K54 և K57) ուժեղացվել են PCR-ով, ինչպես նկարագրված է վերևում:14 Եթե բացասական է, ուժեղացրեք և հաջորդականացրեք wzi տեղանքը՝ պարկուճային սերոտիպային հատուկ գեները որոշելու համար:15 Այս հետազոտության մեջ օգտագործված այբբենարանները թվարկված են Աղյուսակ S1-ում:Դրական PCR արտադրանքները հաջորդականացվել են NextSeq 500 հաջորդականացման հարթակի միջոցով (Illumina, Սան Դիեգո, Կալիֆորնիա, ԱՄՆ):Համեմատեք նուկլեոտիդների հաջորդականությունները՝ գործարկելով BLAST-ը NCBI-ի կայքում (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi):
Բազմակի կայքերի հաջորդականության մուտքագրումը (MLST) իրականացվել է այնպես, ինչպես նկարագրված է Պաստերի ինստիտուտի MLST կայքում (https://bigsdb.pasteur.fr/klebsiella/klebsiella.html):GapA, infB, mdh, pgi, phoE, rpoB և tonB յոթ տնային գեները ուժեղացվել են PCR-ով և հաջորդականացվել:Հերթականության տեսակը (ST) որոշվում է հաջորդականության արդյունքները MLST տվյալների բազայի հետ համեմատելով:
Վերլուծվել է Klebsiella pneumoniae-ի հոմոլոգիան:Klebsiella pneumoniae-ի գենոմային ԴՆԹ-ն արդյունահանվել է որպես ձևանմուշ, և ERIC պրայմերները ներկայացված են Աղյուսակ S1-ում:PCR-ն ուժեղացնում է գենոմային ԴՆԹ-ն և ստեղծում գենոմային ԴՆԹ-ի մատնահետքը:16 PCR արտադրանք հայտնաբերվել է 2% ագարոզայի գել էլեկտրոֆորեզով:ԴՆԹ-ի մատնահետքերի արդյունքները նույնականացվել են QuantityOne ծրագրաշարի տիրույթի ճանաչման միջոցով, իսկ գենետիկական անալիզը կատարվել է թվաբանական միջինի չկշռված զույգ խմբային մեթոդի (UPGMA) միջոցով:Նմանություն ունեցող մեկուսացվածները 75% համարվում են նույն գենոտիպը, իսկ <75% նմանություն ունեցողները՝ տարբեր գենոտիպեր:
Տվյալները վերլուծելու համար օգտագործեք SPSS վիճակագրական ծրագրային փաթեթ Windows 22.0-ի համար:Տվյալները նկարագրված են որպես միջին ± ստանդարտ շեղում (SD):Կատեգորիկ փոփոխականները գնահատվել են chi-square թեստով կամ Fisher's exact թեստով:Բոլոր վիճակագրական թեստերը երկակի են, և <0,05 P արժեքը համարվում է վիճակագրորեն նշանակալի:
Ֆուդանի համալսարանին կից Շանհայի հինգերորդ ժողովրդական հիվանդանոցը հավաքել է 1081 Klebsiella pneumoniae մեկուսացում 2019 թվականի հունվարի 1-ից մինչև 2020 թվականի դեկտեմբերի 31-ը և բացառել է նույն հիվանդի կրկնօրինակ մեկուսացումները:Դրանցից 392 շտամ (36,3%) եղել է hmKP, 341 շտամ (31,5%)՝ CRKP, 39 շտամ (3,6%)՝ CR-hmKP, 16 շտամ (1,5%)՝ CR-hvKP։Հարկ է նշել, որ CR-hmKP-ի 33,3%-ը (13/39) և CR-hvKP-ի 31,2%-ը (5/16) 2019 թվականից են, CR-hmKP-ի 66,7%-ը (26/39) և 68,8%-ը (11/ 16): CR-hvKP-ն առանձնացվել է 2020թ.-ից: Խորխից (17 շտամ), մեզից (12 շտամ), դրենաժային հեղուկից (4 շտամ), արյունից (2 շտամ), թարախից (2 շտամ), լեղուց (1 մեկուսացում) և պլեվրային արտահոսքից: (1 մեկուսացում), համապատասխանաբար:CR-hvKP-ի 16 տեսակ վերականգնվել է թուքից (9 մեկուսացում), մեզից (5 մեկուսացում), արյունից (1 մեկուսացում) և պլևրային արտահոսքից (1 մեկուսացում):
Շտամի նույնականացման, դեղամիջոցների նկատմամբ զգայունության թեստի, լարային թեստի և վիրուսայնության հետ կապված գեների հայտնաբերման միջոցով ստուգվել են 16 CR-hvKP շտամներ:CR-hvKP մեկուսացվածներով վարակված 16 հիվանդների կլինիկական բնութագրերն ամփոփված են Աղյուսակ 1-ում: 16 հիվանդներից 13-ը (81.3%) տղամարդիկ էին, իսկ բոլոր հիվանդները՝ 62 տարեկանից բարձր (միջին տարիքը՝ 83.1±10.5 տարի):Նրանք եկել են 8 հիվանդասենյակից, իսկ կեսից ավելին եկել են կենտրոնական ԲՈՒՀ-ից (9 դեպք):Հիմնական հիվանդությունները ներառում են ուղեղային անոթային հիվանդություն (75%, 12/16), հիպերտոնիա (50%, 8/16), թոքերի քրոնիկ օբստրուկտիվ հիվանդություն (50%, 8/16) և այլն: Ինվազիվ վիրաբուժությունը ներառում է մեխանիկական օդափոխություն (62.5%, 10/): 16), միզուղիների կաթետեր (37,5%, 6/16), ստամոքսի խողովակ (18,8%, 3/16), վիրաբուժություն (12,5%, 2/16) և ներերակային կաթետեր (6,3%, 1/16):16 հիվանդներից 9-ը մահացել են, իսկ 7-ի վիճակը բարելավվել է և դուրս է գրվել։
39 CR-hmKP մեկուսացվածները բաժանվել են երկու խմբի՝ ըստ կպչուն պարանի երկարության:Դրանցից 20 CR-hmKP մեկուսացված մածուցիկ պարանի երկարությամբ ≤ 25 մմ բաժանվել է մի խմբի, իսկ 19 CR-hmKP մեկուսացված մածուցիկ լարային երկարությամբ> 25 մմ՝ մեկ այլ խմբի:PCR մեթոդը հայտնաբերում է վիրուլենտության հետ կապված rmpA, rmpA2, iutA և iucA գեների դրական դրույքաչափը:Երկու խմբերում CR-hmKP վիրուլենտության հետ կապված գեների դրական գործակիցները ներկայացված են Աղյուսակ 2-ում: Երկու խմբերի միջև CR-hmKP վիրուլենտության հետ կապված գեների դրական մակարդակի վիճակագրական տարբերություն չկա:
Աղյուսակ 3-ում ներկայացված են 16 դեղամիջոցների մանրէաբանական դիմադրության մանրամասն պրոֆիլները:16 CR-hvKP մեկուսացում ցույց է տվել բազմադեղորայքային դիմադրություն:Բոլոր մեկուսացումները մշակվել են ամպիցիլինով, ամպիցիլին/սուլբակտամով, ցեֆոպերազոնով/սուլբակտամով, պիպերացիլին/տազոբակտամով, ցեֆազոլինով, ցեֆուրոքսիմով, ցեֆտազիդիմով, ցեֆտրիաքսոնով, ցեֆեպիմով, ցեֆոքսիտինով, իմիպենեմով և մերոպենեմը դիմացկուն են:Տրիմեթոպրիմ-սուլֆամետոքսազոլը ունեցել է ամենացածր դիմադրողականությունը (43,8%), որին հաջորդում են ամիկացինը (62,5%), գենտամիցինը (68,8%) և ցիպրոֆլոքասինը (87,5%):
Վիրուլենտության հետ կապված գեների, հակամանրէային դիմադրության գեների, պարկուճային սերոտիպային գեների և 16 CR-hvKP մեկուսացված MLST-ի բաշխվածությունը ներկայացված է Նկար 1-ում: Ագարոզայի գելային էլեկտրոֆորեզի արդյունքները որոշ վիրուսայնության հետ կապված գեների, հակամանրէային դիմադրության գեների և պարկուճային սերոտիպային գեների գեներ են: ցույց է տրված Նկար 1-ում: Նկար 2. MLST վերլուծությունը ցույց է տալիս ընդհանուր առմամբ 3 ST-ներ, ST11-ը ամենատիրական ST-ն է (87.5%, 14/16), որին հաջորդում են ST23 (6.25%, 1/16) և ST86 (6.25%, 1): /16):Ըստ wzi typing-ի արդյունքների՝ հայտնաբերվել են 4 տարբեր պարկուճային սերոտիպեր (Նկար 1):16 կարբապենեմ-դիմացկուն hvKP մեկուսացվածներից K64-ը ամենատարածված սերոտիպն է (n=13), որին հաջորդում են K1 (n=1), K2 (n=1) և K47 (n=1):Բացի այդ, պարկուճային սերոտիպի K1 շտամը ST23 է, պարկուճային սերոտիպի K2 շտամը ST86 է, իսկ K64-ի մնացած 13 շտամները և K47-ի 1 շտամները բոլորը ST11 են:CR-hvKP 16 մեկուսացված 9 վիրուսային գեների դրական գործակիցները ներկայացված են Նկար 1-ում: Վիրուլենտության հետ կապված գեները entB, fimH, rmpA2, iutA և iucA առկա են 16 CR-hvKP շտամներում, որին հաջորդում է mrkD (n = 14), rmpA (n = 13), aerobacterin (n = 2), AllS (n=1):16 CR-hvKP մեկուսացումները բոլորն էլ կրում են կարբապենեմազի blaKPC-2 գենը և ընդլայնված սպեկտրի β-լակտամազային blaSHV գենը:16 CR-hvKP մեկուսացումներ չեն կրում կարբապենեմի blaNDM, blaVIM, blaIMP, blaOXA-48 և ընդլայնված սպեկտրի β-լակտամազային blaTEM, blaCTX-M-2 խումբ և blaCTX-M-8 գեներ:CR-hvKP 16 շտամներից 5 շտամներ կրում էին ընդլայնված սպեկտրի β-լակտամազ գենի blaCTX-M-1 խումբը, իսկ 6 շտամներ կրում էին ընդլայնված սպեկտրի β-լակտամազ գենի blaCTX-M-9 խումբը:
Նկար 1 Վիրուլենտության հետ կապված գեները, հակամանրէային դիմադրության գեները, պարկուճային սերոտիպային գեները և 16 CR-hvKP մեկուսացման MLST:
Նկար 2 Ագարոզայի գելային էլեկտրոֆորեզ՝ կապված որոշ վիրուսային գեների, հակամանրէային դիմադրության գեների և պարկուճային սերոտիպային գեների:
Նշում. M, ԴՆԹ մարկեր;1, blaKPC (893bp);2, entB (400bp);3, rmpA2 (609bp);4, rmpA (429bp);5, iucA (239bp);6, iutA (880bp);7, Aerobacterin (556bp);8, K1 (1283bp);9, K2 (641bp);10, բոլորը S (508bp);11, mrkD (340bp);12, fimH (609bp):
ERIC-PCR-ն օգտագործվել է 16 CR-hvKP մեկուսացման հոմոլոգիայի վերլուծության համար:PCR ամպլիֆիկացիայից և ագարոզայի գելային էլեկտրոֆորեզից հետո կան 3-9 ԴՆԹ բեկորներ:Մատնահետքերի արդյունքները ցույց են տվել, որ 16 CR-hvKP մեկուսացումներ շատ պոլիմորֆ են, և մեկուսացվածների միջև ակնհայտ տարբերություններ են եղել (Նկար 3):
Վերջին տարիներին ավելի ու ավելի շատ են հաղորդումները CR-hvKP մեկուսացման վերաբերյալ:CR-hvKP մեկուսացվածների հայտնվելը մեծ վտանգ է ներկայացնում հանրային առողջության համար, քանի որ դրանք կարող են առողջ մարդկանց մոտ լուրջ, դժվար բուժվող վարակների պատճառ դառնալ:Այս ուսումնասիրության ընթացքում ուսումնասիրվել են CR-hvKP-ի տարածվածությունը և մոլեկուլային համաճարակաբանական բնութագրերը Շանհայի երրորդային հիվանդանոցում 2019-2020 թվականներին՝ գնահատելու համար, թե արդյոք կա CR-hvKP-ի բռնկման վտանգ և դրա զարգացման միտումը այս ոլորտում:Միևնույն ժամանակ, այս ուսումնասիրությունը կարող է ապահովել կլինիկական վարակիչության ավելի համապարփակ գնահատում, ինչը մեծ նշանակություն ունի նման մեկուսացման հետագա տարածումը կանխելու համար։
Այս ուսումնասիրությունը հետահայաց վերլուծել է CR-hvKP-ի կլինիկական բաշխումը և միտումը 2019-ից մինչև 2020 թվականը: 2019-ից 2020 թվականներին CR-hvKP մեկուսացումները ցույց են տվել աճի միտում:CR-hvKP-ի մոտավորապես 31,2%-ը (5/16) մեկուսացվել է 2019 թվականին, իսկ CR-hvKP-ի 68,8%-ը (11/16) մեկուսացվել է 2020 թվականին, ինչը համապատասխանում է գրականության մեջ հաղորդված CR-hvKP-ի աճի միտումին:Քանի որ Zhang et al.CR-hvKP-ն առաջին անգամ նկարագրվել է 2015 թվականին,10 ավելի ու ավելի շատ CR-hvKP գրականություն է հաղորդվել, 17-20 հիմնականում Ասիա-Խաղաղօվկիանոսյան տարածաշրջանում, հատկապես Չինաստանում:CR-hvKP-ն սուպեր վիրուսային և բազմադեղորայքային դիմադրողականություն ունեցող գերբակտերիա է:Այն վնասակար է մարդկանց առողջության համար, ունի մահացության բարձր ցուցանիշ։Ուստի պետք է ուշադրություն դարձնել և միջոցներ ձեռնարկել դրա տարածումը կանխելու համար։
CR-hvKP 16 մեկուսացման հակաբիոտիկների դիմադրության վերլուծությունը ցույց է տվել հակաբիոտիկների նկատմամբ կայունության բարձր մակարդակ:Բոլոր մեկուսացումները մշակվել են ամպիցիլինով, ամպիցիլին/սուլբակտամով, ցեֆոպերազոնով/սուլբակտամով, պիպերացիլին/տազոբակտամով, ցեֆազոլինով, ցեֆուրոքսիմով, ցեֆտազիդիմով, ցեֆտրիաքսոնով, ցեֆեպիմով, ցեֆոքսիտինով, իմիպենեմով և մերոպենեմը դիմացկուն են:Տրիմեթոպրիմ-սուլֆամետոքսազոլը ունեցել է ամենացածր դիմադրողականությունը (43,8%), որին հաջորդում են ամիկացինը (62,5%), գենտամիցինը (68,8%) և ցիպրոֆլոքասինը (87,5%):Lingling Zhan-ի և մյուսների կողմից ուսումնասիրված CR-hmkp-ի դիմադրության մակարդակը նման է այս հետազոտությանը [12]:CR-hvKP-ով վարակված հիվանդներն ունեն բազմաթիվ հիմնական հիվանդություններ, ցածր իմունիտետ և թույլ անկախ ստերիլիզացման ունակություն:Հետեւաբար, հակամանրէային զգայունության թեստի արդյունքների հիման վրա ժամանակին բուժումը շատ կարեւոր է:Անհրաժեշտության դեպքում վարակված տեղը կարող է հայտնաբերվել և բուժվել դրենաժային, դեբրիդինգի և այլ մեթոդներով:
39 CR-hmKP մեկուսացվածները բաժանվել են երկու խմբի՝ ըստ կպչուն պարանի երկարության:Դրանցից 20 CR-hmKP մեկուսացված մածուցիկ պարանի երկարությամբ ≤ 25 մմ բաժանվել է մի խմբի, իսկ 19 CR-hmKP մեկուսացված մածուցիկ լարային երկարությամբ> 25 մմ՝ մեկ այլ խմբի:Համեմատելով CR-hmKP վիրուլենտության հետ կապված գեների դրական գործակիցները երկու խմբերի միջև, երկու խմբերի միջև վիրուլենտության գեների դրական դրույքաչափերի մեջ վիճակագրորեն նշանակալի տարբերություն չկա:Lin Ze et al.ցույց է տվել, որ Klebsiella pneumoniae-ի վիրուսային գեների դրական գործակիցը զգալիորեն ավելի բարձր է, քան դասական Klebsiella pneumoniae-ի:21 Այնուամենայնիվ, արդյո՞ք վիրուսային գեների դրական մակարդակը դրականորեն կապված է կպչուն շղթայի երկարության հետ, մնում է անհասկանալի:Այլ ուսումնասիրություններ ցույց են տվել, որ դասական Klebsiella pneumoniae-ն կարող է նաև լինել բարձր վիրուլենտ Klebsiella pneumoniae, որն ունի վիրուսային գեների ավելի բարձր դրական գործակից:22 Այս ուսումնասիրությունը ցույց տվեց, որ CR-hmKP-ի վիրուսային գենի դրական դրույքաչափը դրականորեն կապված չէ լորձի երկարության հետ:Թել (կամ չի ավելանում կպչուն պարանի երկարությամբ):
Այս հետազոտության ERIC PCR մատնահետքերը պոլիմորֆ են, և հիվանդների միջև կլինիկական խաչմերուկ չկա, հետևաբար CR-hvKP վարակով 16 հիվանդները սպորադիկ դեպքեր են:Նախկինում CR-hvKP-ով առաջացած վարակների մեծ մասը հաղորդվել է որպես մեկուսացված կամ սպորադիկ դեպքեր, 23,24 և CR-hvKP-ի փոքր բռնկումները հազվադեպ են գրականության մեջ:11,25 ST11-ը Չինաստանում CRKP և CR-hvKP մեկուսացման ամենատարածված ST11-ն է:26,27 Չնայած ST11 CR-hvKP-ն այս հետազոտության մեջ կազմում էր 87.5% (14/16) 16 CR-hvKP մեկուսացվածներից, չի կարելի ենթադրել, որ 14 ST11 CR-hvKP շտամները նույն կլոնից են, ուստի ERIC PCR մատնահետքերը պահանջվում է.Հոմոլոգիայի վերլուծություն.
Այս հետազոտության ընթացքում CR-hvKP-ով վարակված բոլոր 16 հիվանդները ենթարկվել են ինվազիվ վիրահատության:Ըստ զեկույցների, օդափոխիչի հետ կապված թոքաբորբի մահացու բռնկումը, որն առաջացել է CR-hvKP11-ով, ցույց է տալիս, որ ինվազիվ ընթացակարգերը կարող են մեծացնել CR-hvKP վարակի վտանգը:Միաժամանակ, CR-hvKP-ով վարակված 16 հիվանդ ունի հիմքում ընկած հիվանդություններ, որոնցից ամենատարածվածն են ուղեղի անոթային հիվանդությունները։Նախորդ ուսումնասիրությունը ցույց է տվել, որ ուղեղի անոթային հիվանդությունը CR-hvKP վարակի զգալի անկախ ռիսկի գործոն է:28 Այս երևույթի պատճառը կարող է լինել ուղեղի անոթային հիվանդությամբ հիվանդների թուլացած իմունիտետը, պաթոգեն բակտերիաները չեն կարող ինքնուրույն բացառվել, և հիմնվել միայն դրանց մանրէասպան ազդեցության վրա։Հակաբիոտիկները երկարաժամկետ հեռանկարում կհանգեցնեն բազմադեղորայքային դիմադրության և հիպերվիրուլենտության համակցության:16 հիվանդներից 9-ը մահացել են, իսկ մահացությունը կազմել է 56,3% (9/16):Մահացության մակարդակը ավելի բարձր է, քան 10,12-ը նախորդ ուսումնասիրություններում, և ավելի ցածր, քան 11,21-ը, որը նշված էր նախորդ հետազոտություններում:16 հիվանդների միջին տարիքը եղել է 83,1±10,5 տարի, ինչը ցույց է տալիս, որ տարեցներն ավելի զգայուն են CR-hvKP-ի նկատմամբ:Նախորդ հետազոտությունները ցույց են տվել, որ երիտասարդներն ավելի հակված են վարակվելու:Klebsiella pneumoniae-ի վիրուլենտությունը:29 Այնուամենայնիվ, այլ ուսումնասիրություններ ցույց են տվել, որ տարեցները ենթակա են բարձր վիրուլենտ Klebsiella pneumoniae24,28:Այս ուսումնասիրությունը համահունչ է դրան:
16 CR-hvKP շտամներից, բացառությամբ մեկ ST23 CR-hvKP-ի և մեկ ST86 CR-hvKP-ի, մնացած 14 շտամները բոլորն էլ ST11 CR-hvKP են:ST23 CR-hvKP-ին համապատասխան պարկուճային սերոտիպը K1-ն է, իսկ ST86 CR-HVKP-ի համապատասխան պարկուճային սերոտիպը K2-ն է՝ նախորդ հետազոտությունների նման:ST23 (K1) CR-hvKP կամ ST86 (K2) CR-hvKP-ով վարակված 30-32 հիվանդ մահացել է, իսկ մահացության մակարդակը (100%) զգալիորեն ավելի բարձր է եղել, քան ST11 CR-hvKP-ով վարակված հիվանդների (50%):Ինչպես ցույց է տրված Նկար 1-ում, վիրուլենտության հետ կապված գեների ST23 (K1) կամ ST86 (K2) շտամների դրական գործակիցը ավելի բարձր է, քան ST11 (K64) շտամների:Մահացությունը կարող է կապված լինել վիրուլենտության հետ կապված գեների դրական մակարդակի հետ:Այս հետազոտության մեջ CR-hvKP-ի 16 շտամներ բոլորը կրում են կարբապենեմազի blaKPC-2 գենը և ընդլայնված սպեկտրի β-լակտամազի blaSHV գենը:blaKPC-2-ը Չինաստանում CR-hvKP-ում ամենատարածված կարբապենեմազային գենն է:33 Zhao et al.-ի ուսումնասիրության մեջ 25blaSHV-ն ընդլայնված սպեկտրի β-լակտամազային գենն է՝ ամենաբարձր դրական ցուցանիշով:entB, fimH, rmpA2, iutA և iucA վիրուսային գեները առկա են բոլոր 16 CR-hvKP մեկուսացվածներում, որին հաջորդում են mrkD (n=14), rmpA (n=13), անաէրոբիցին (n=2), allS (n =): 1), որը նման է նախորդ ուսումնասիրությանը:Որոշ ուսումնասիրություններ ցույց են տվել, որ rmpA-ն և rmpA2-ը (լորձի ֆենոտիպային գեների մոդուլատորները) կարող են խթանել պարկուճային պոլիսախարիդների սեկրեցումը, ինչը հանգեցնում է հիպերմուկոիդ ֆենոտիպերի և վիրուսայնության բարձրացման:35 Աերոբակտերինները կոդավորված են iucABCD գենով, իսկ նրանց հոմոլոգ ընկալիչները կոդավորված են iutA գենով, ուստի նրանք ունեն ավելի բարձր վիրուլենտություն G. mellonella վարակի վերլուծության մեջ:allS-ը K1-ST23-ի մարկեր է, ոչ pLVPK-ում, pLVPK-ն վիրուլենտության պլազմիդ է K2 սուպերվիրուլենտության տիպից:allS-ը HTH տիպի տառադարձման ակտիվացնող է:Հայտնի է, որ այս վիրուլենտ գեները նպաստում են վիրուսայնությանը և պատասխանատու են գաղութացման, ներխուժման և պաթոգենության համար:36
Այս ուսումնասիրությունը նկարագրում է CR-hvKP-ի տարածվածությունը և մոլեկուլային համաճարակաբանությունը Շանհայում, Չինաստան:Չնայած CR-hvKP-ով առաջացած վարակը սպորադիկ է, այն տարեցտարի ավելանում է:Արդյունքները հաստատում են նախորդ հետազոտությունները և ցույց են տալիս, որ ST11 CR-hvKP-ն ամենահայտնի CR-hvKP-ն է Չինաստանում:ST23-ը և ST86 CR-hvKP-ն ավելի բարձր վիրուլենտություն են ցույց տվել, քան ST11 CR-hvKP-ն, չնայած նրանք երկուսն էլ բարձր վիրուլենտ են Klebsiella pneumoniae:Քանի որ բարձր վիրուլենտ Klebsiella pneumoniae-ի տոկոսը մեծանում է, Klebsiella pneumoniae-ի դիմադրողականությունը կարող է նվազել, ինչը կհանգեցնի կլինիկական պրակտիկայում կույր լավատեսության:Ուստի անհրաժեշտ է ուսումնասիրել Klebsiella pneumoniae-ի վիրուսայնությունը և դեղորայքային դիմադրությունը:
Այս ուսումնասիրությունը հաստատվել է Շանհայի հինգերորդ ժողովրդական հիվանդանոցի բժշկական էթիկայի հանձնաժողովի կողմից (թիվ 104, 2020 թ.):Կլինիկական նմուշները սովորական հիվանդանոցային լաբորատոր պրոցեդուրաների մի մասն են:
Շնորհակալություն Շանհայի հինգերորդ ժողովրդական հիվանդանոցի կենտրոնական լաբորատորիայի ողջ անձնակազմին՝ այս ուսումնասիրության համար տեխնիկական ուղղորդում տրամադրելու համար:
Այս աշխատանքին աջակցել է Շանհայի Մինհան շրջանի բնական գիտությունների հիմնադրամը (հաստատման համարը՝ 2020MHZ039):
1. Navon-Venezia S, Kondratyeva K, Carattoli A. Klebsiella pneumoniae. հակաբիոտիկների դիմադրության հիմնական գլոբալ աղբյուրը և մաքոքը:FEMS մանրէաբանության վերանայված հրատարակություն 2017;41 (3): 252–275։doi:10.1093/femsre/fux013
2. Prokesch BC, TeKippe M, Kim J և այլն: Առաջնային օստեոմիելիտ, որն առաջացել է բարձր թունավորության պատճառով:Lancet-ը վարակված է Dis-ով:2016; 16 (9): e190–e195:doi:10.1016/S1473-3099(16)30021-4
3. Shon AS, Bajwa RPS, Russo TA:Բարձր վիրուլենտություն (սուպեր լորձ):Klebsiella pneumoniae virulence.2014 թ.4 (2): 107–118։doi:10.4161/virus.22718
4. Paczosa MK, Mecsas J. Klebsiella pneumoniae. Շարունակեք հարձակումը ուժեղ պաշտպանությամբ:Microbiol Mol Biol Rev. 2016;80 (3): 629–661:doi:10.1128/MMBR.00078-15
5. Fang C, Chuang Y, Shun C, et al.Klebsiella pneumoniae-ի վիրուսային նոր գեներ, որոնք առաջացնում են լյարդի առաջնային թարախակույտ և սեպսիսի մետաստատիկ բարդություններ:J Exp Med.2004; 199 (5): 697-705:doi:10.1084/jem.20030857
6. Russo TA, Olson R, Fang CT և այլն: J Clin Microbiol-ի նույնականացում, բիոմարկեր, որն օգտագործվում է բարձր վիրուլենտ Klebsiella pneumoniae-ն դասական Klebsiella pneumoniae-ից տարբերելու համար:2018; 56 (9): e00776.
7. YCL, Cheng DL, Lin CL.Klebsiella pneumoniae լյարդի թարախակույտ, որը կապված է վարակիչ էնդոֆթալմիտի հետ:Arch intern բժիշկ.1986; 146 (10): 1913-1916 թթ.doi:10.1001/archinte.1986.00360220057011
8. Chiu C, Lin D, Liaw Y. Metastatic septic endophthalmitis լյարդի թարախային թարախակույտում:J Կլինիկական գաստրոէնտերոլոգիա.1988, 10 (5): 524–527:doi:10.1097/00004836-198810000-00009
9. Guo Yan, Wang Shun, Zhan Li և այլն: Չինաստանում ինվազիվ վարակների հետ կապված բարձր լորձաթաղանթային Klebsiella pneumoniae մեկուսացման մանրէաբանական և կլինիկական բնութագրերը:Նախաբջիջները վարակված են միկրոօրգանիզմներով։2017; 7.
10. Zhang Yi, Zeng Jie, Liu Wei և այլն: Չինաստանում կլինիկական ինֆեկցիաներում կարբապենեմակայուն Klebsiella pneumoniae-ի խիստ վիրուլենտ շտամի առաջացումը [J]:J վարակ.2015 թ.71 (5): 553–560 թթ.doi:10.1016/j.jinf.2015.07.010
11. Գու Դե, Դոնգ Նան, Չժեն Չժոն և այլն: ST11 կարբապենեմ-դիմացկուն բարձր վիրուլենտ Klebsiella թոքաբորբի մահացու բռնկում չինական հիվանդանոցում. մոլեկուլային համաճարակաբանական ուսումնասիրություն:Lancet-ը վարակված է Dis-ով:2018; 18 (1): 37–46.doi:10.1016/S1473-3099(17)30489-9
12. Zhan Li, Wang S, Guo Yan, et al.Կարբապենեմ-դիմացկուն ST11 գերմուկոիդ Klebsiella pneumoniae շտամի բռնկում Չինաստանի երրորդական հիվանդանոցում:Նախաբջիջները վարակված են միկրոօրգանիզմներով։2017; 7.
13. FRE, Messai Y, Alouache S և այլն: Klebsiella pneumoniae virulence սպեկտրը և դեղերի զգայունության մոդելը մեկուսացված տարբեր կլինիկական նմուշներից [J]:Պաթոֆիզիոլոգիա.2013; 61 (5): 209-216:doi:10.1016/j.patbio.2012.10.004
14. Turton JF, Perry C, Elgohari S և այլն: Klebsiella pneumoniae-ի PCR բնութագրում և տիպավորում՝ օգտագործելով պարկուճային տիպի առանձնահատկությունը, տանդեմային կրկնությունների փոփոխական թիվը և վիրուսային գենի թիրախները[J]:J Med Microbiology.2010 թ.59 (Գլուխ 5): 541–547 թթ.doi:10.1099/jmm.0.015198-0
15. Brisse S, Passet V, Haugaard AB և այլն: Wzi գեների հաջորդականացում, արագ մեթոդ Klebsiella պարկուճի տեսակը որոշելու համար:J Կլինիկական մանրէաբանություն.2013; 51 (12): 4073-4078:doi:10.1128/JCM.01924-13
16. Ranjbar R, Tabatabaee A, Behzadi P և այլն: E. coli շտամներ, որոնք մեկուսացված են կենդանիների տարբեր ֆեկալ նմուշներից, էնտերոբակտերիաների կրկնվող գեների տիպային կոնսենսուս պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի (ERIC-PCR) գենոտիպավորում[J]:Իրան Ջ Պաթոլ.2017 թ.12 (1): 25–34.doi:10.30699/ijp.2017.21506