Անուղղակի ELISA մեթոդի մշակում խոզի սուր լուծի համախտանիշի կորոնավիրուսային IgG հակամարմինների հայտնաբերման համար՝ հիմնված ռեկոմբինանտ հասկ սպիտակուցի վրա

Խոզի սուր լուծի համախտանիշ Կորոնավիրուսը (SADS-CoV) նոր հայտնաբերված խոզի աղիքային ախտածին կորոնավիրուս է, որը կարող է ջրային լուծ առաջացնել նորածին խոզերի մոտ և զգալի տնտեսական կորուստներ պատճառել խոզերի արդյունաբերությանը:Ներկայումս SADS-CoV վարակի և պատվաստանյութի արդյունավետությունը գնահատելու համար չկա համապատասխան շճաբանական մեթոդ, ուստի անհրաժեշտ է հրատապ օգտագործել արդյունավետ ֆերմենտային իմունոսորբենտ վերլուծություն (ELISA)՝ փոխհատուցելու այս անբավարարությունը:Այստեղ SADS-CoV հասկ (S) սպիտակուցն արտահայտող ռեկոմբինանտ պլազմիդ՝ միաձուլված մարդկային IgG Fc տիրույթի հետ, կառուցվել է ռեկոմբինանտ բակուլովիրուս արտադրելու համար և արտահայտվել HEK 293F բջիջներում։S-Fc սպիտակուցը մաքրվում է G սպիտակուցի խեժով և պահպանում է ռեակտիվությունը հակամարդկային Fc և հակա-SADS-CoV հակամարմիններով:Այնուհետև S-Fc սպիտակուցը օգտագործվել է անուղղակի ELISA (S-iELISA) մշակելու և S-iELISA-ի ռեակցիայի պայմանների օպտիմալացման համար:Արդյունքում, վերլուծելով 40 SADS-CoV բացասական շիճուկների OD450nm արժեքը, որը հաստատվել է իմունֆլյուորեսցենտային վերլուծությամբ (IFA) և Western blotting-ով, սահմանվել է 0,3711 հատման արժեքը:6 SADS-CoV դրական շիճուկների տատանումների գործակիցը (CV) S-iELISA-ի փորձարկումների միջև և դրանց միջև բոլորը 10%-ից պակաս էին:Խաչաձև ռեակտիվության թեստը ցույց է տվել, որ S-iELISA-ն խաչաձև ռեակտիվություն չունի խոզի վիրուսի այլ շիճուկների հետ:Բացի այդ, հիմնվելով 111 կլինիկական շիճուկի նմուշների հայտնաբերման վրա, IFA-ի և S-iELISA-ի ընդհանուր համընկնման մակարդակը կազմել է 97,3%:Վիրուսի չեզոքացման թեստը շիճուկի 7 տարբեր OD450nm արժեքներով ցույց է տվել, որ S-iELISA-ի կողմից հայտնաբերված OD450nm արժեքը դրականորեն փոխկապակցված է վիրուսի չեզոքացման թեստի հետ:Վերջապես, S-iELISA-ն իրականացվել է խոզաբուծական ֆերմայի 300 շիճուկի նմուշների վրա:Խոզի այլ էնտերովիրուսների առևտրային փաթեթները ցույց են տվել, որ SADS-CoV, TGEV, PDCoV և PEDV IgG դրական ցուցանիշները համապատասխանաբար կազմել են 81,7%, 54% և 65,3%:, համապատասխանաբար 6%։Արդյունքները ցույց են տալիս, որ S-iELISA-ն հատուկ է, զգայուն և վերարտադրելի, և կարող է օգտագործվել խոզերի արդյունաբերության մեջ SADS-CoV վարակը հայտնաբերելու համար:Այս հոդվածը պաշտպանված է հեղինակային իրավունքով:բոլոր իրավունքները պաշտպանված են.


Հրապարակման ժամանակը՝ հունիս-22-2021